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GET到這些點,才能選對qPCR儀

    上次有讀者給小編留言,說自己的實驗室想買一臺qPCR儀,由于價格不菲,就怕買錯了對以后的實驗和經費都帶來麻煩。這里小編要說一句,好的產品越用越順心,差的產品越用越糟心。那么今天小編就和大家介紹一下一臺出色的qPCR儀需要具備哪些特點呢。

    無論是選擇國產還是進口的qPCR儀,首先要從儀器光學檢測的技術方案來著手,因為這是qPCR 儀的核心技術,它決定了實驗的準確性、可靠性和重復性。


一、采用頂部檢測CCD技術


    目前來看,頂部檢測CCD技術是定量PCR儀的最佳技術方案。國內頂尖qPCR儀和國外主流qPCR儀都采用這種技術,比如美國Thermofisher的Q5/7500,ROCHE的LC480/96,BIORAD的CFX96,以及德國JENA的qTOWER,國內有朗基的Q1000/Q2000系列產品。這種頂部檢測技術采用相機原理,直接從PCR管的上方對樣品進行實時檢測,采光面平行性好,采光面積大,因此小體積反應液都能放心使用(如圖1)。

    眾所周知,采用頂部檢測技術的 qPCR儀所需要的反應體積只需5-10ul即可,(而其他檢測方案的qPCR儀至少需要20ul以上),從而很大程度地降低了實驗成本。實驗達人們最清楚qPCR試劑有多貴了,能省一半的試劑就是省下大把的銀子啊

圖1  10ul,2倍稀釋4個重復

在Q2000上獲得的結果

    


二、能用0.1ml白管


     經常做實驗的小伙伴知道,傳統定性PCR儀常用0.2ml透明管,所以使用0.2ml透明管成了一種習慣。但是對于定量PCR儀來說,0.2ml透明管絕不是最佳選擇。因為樣品井無法保證始終如一的干凈,透明管也不能控制光不折射。

    這里小編要告訴你一個獲得最佳結果的訣竅——就是改變習慣,使用白管。因為不透明的白管能屏蔽背景噪音,即使樣品井有點臟都沒有關系。另外,白管還能減少光的折射損失,信噪比和靈敏度更高,因此可獲得比透明管更佳的實驗效果。頂部檢測CCD方案絕配白管,可實現1+1>2的優勢。

圖2  qPCR專用0.1白管

   

     另外,0.1ml管由于光程比0.2ml管更短,因而熒光信號更穩定,靈敏度更高(可點擊查看:干貨 | 為什么qPCR高手都愛用0.1ml管?)。國內PCR儀一線品牌朗基科儀就是采用SSLP短光程靜態熒光CCD成像技術,巧妙地將頂部檢測的光程縮小到100mm(而羅氏LC480的光程達到800mm),既可使用白管,又適用0.1ml管。這項創新技術使得朗基Q2000型96孔熒光定量PCR儀的體積更是做到了進口同類產品的一半甚至更小,大大節約了實驗室空間。


圖3   朗基Q1000 & Q2000熒光定量PCR儀



三、升降溫速率越快越好


    無論是普通pcr儀還是熒光定量pcr儀,升降溫速率都決定了實驗所需的時間,當然是越快越好咯。能快速達到目標溫度,從而縮短實驗時間和提高工作效率肯定是一臺優秀的qPCR儀應具備的品質。而對于PCR儀的變溫速率來說,每秒增加1度都是半導體技術的一次飛躍。


四、通量越大越好


    儀器的通量,包括孔數和通道數。目前市場上有8孔、16孔、48孔、96孔,還有384孔,通道數有二通道、四通道、五通道和六通道可以選擇。那我們應該怎么選呢?!


    買產品并不只為當下需要,更多的要考慮未來,當然是孔數越多越好,通道數越多越好。無論是科學研究還是疾病診斷,都會越來越多地使用高通量熒光定量PCR儀。需要注意的是,有些進口廠家的儀器只對自家生產的多通道染料開放,所以有較大的局限性,選擇時需謹慎。


五、軟件功能越多越好


    要說硬件是骨,軟件就是血肉靈魂。出色的軟件不僅賦予儀器齊全的功能、簡便的操作,還能帶來美好的客戶體驗和完善的實驗結果。相對定量、絕對定量、熔解曲線、基因分型(SNPs)和陰陽性判定這些都是qPCR軟件必不可少的功能,如果有HRM和統計學分析模式功能那就更完美了。


    在了解完這幾點之后,小伙伴們應該心中自有一本譜了吧?小編希望各位都能買到一臺稱心如意的qPCR儀。



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